Дифференциальное центрифугирование

Дифференциальное центрифугирование основано на зависимости скорости седиментации частиц от их массы и размера от центробежной силы. Разделение гетерогенной системы на отдельные компоненты производят путем ступенчатого увеличения центробежной силы. Режим центрифугирования подбирают таким образом, чтобы на каждом этапе происходило осаждение на дно центрифужной пробирки лишь одного компонента смеси. Однако получение абсолютно чистого компонента практически невозможно. Это связано с тем, что до начала центрифугирования все частицы независимо от их массы или размера распределены равномерно по толще жидкости в центрифужной пробирке и уже при малой частоте вращения мелкие частицы, изначально близко находящиеся к дну пробирки, осаждаются. Поэтому для большей очистки исследуемой фракции ее промывают: осадок после удаления супернатанта гомогенизируют со свежей порцией среды суспендирования и повторно центрифугируют при соответствующей центробежной силе. Иногда в целях повышения степени очистки фракции частиц промывание производят 2 — 3 раза.

Метод дифференциального центрифугирования чрезвычайно широко используют для разделения внутриклеточных структур. Он позволяет получить фракции ядер, хлоропластов, митохондрий, рибосом и т. д.

Центрифугирование в градиенте плотности дает возможность провести дальнейшую очистку исследуемых структур. В основе метода лежит зависимость скорости седиментации частиц от плотности среды, в которой происходит центрифугирование.