Процесс выделения протопластов

Во-вторых, в процессе выделения протопластов удаляются соединения, находящиеся в клеточной стенке и сосудистых тканях листа, неблагоприятно влияющие на хлоропласты. При механическом разрушении тканей эти соединения высвобождаются, и их воздействие можно свести к минимуму только путем быстрого отделения органелл центрифугированием. Например, при работе с листьями подсолнечника, содержащими фенолы, механически выделенные хлоропласты ассимилируют С02 довольно медленно, несмотря на внесение в среду выделения очень большого количества различных защитных соединений. И наоборот, хлоропласты, выделенные из протопластов подсолнечника, обладают высокой активностью. Точно так же активные хлоропласты нельзя получить механическим способом из флаговых листьев пшеницы, но они успешно выделяются из протопластов.

Выделение органелл с высокой степенью интактности позволяет исследовать темновые реакции фотосинтеза, механизмы регуляции отдельных стадий фотосинтеза. Кроме того, сами протопласты являются важным инструментом в исследовании таких вопросов, как внутриклеточное распределение метаболитов в процессе фотосинтеза, внутриклеточная локализация фотосинтети — ческих ферментов, межклеточная компартментация фотосинтеза у С3-, С4- и CAM-растений. Интактные протопласты и клетки позволяют также проследить процесс фотосинтеза при высокой концентрации С02 в системе, т. е. избежать ограничений, возникающих при работе с интактными листьями. При этом, однако, следует учитывать снижение транспорта ассимилятов из изолированных клеток, а также довольно активное передвижение углеводов к местам регенерации клеточных стенок вследствие раневого эффекта, что может привести к некоторым нарушениям метаболизма в клетке.