Фотохимическая активность
При выделении в водной среде хлоропласта сохраняют фотохимическую активность, так как при этом не нарушаются ламеллярные структуры, но хлоропласта теряют часть водорастворимых комплексов, главным образом ферменты углеродного цикла. Поэтому хлоропласта, изолированные в водные среды, мало способны к реакциям восстановления С02.
При выделении в органической, безводной среде хлоропласта сохраняют целостность стромы и содержащиеся в ней водорастворимые вещества, но теряют способность к ряду фотохимических реакций вследствие экстракции жирорастворимых компонентов ламелл и нарушения систем транспорта электронов. Применение органических сред выделения оказалось эффективным при исследовании локализации в хлоропластах минеральных элементов, белков, ферментов, при изучении продуктов фотосинтеза и ряда реакций, требующих сохранения стромы.
При определении фосфорилирующей и восстановительной активности хлоропластов обычно используют водные среды выделения. Они должны быть изотоничны и химически инертны по отношению к компонентам хлоропластов и иметь определенное значение pH, что достигается добавлением фосфатного буфера, трис-, трицин-буфера или других буферных систем.
Выделение хлоропластов из протопластов в ряде случаев является более предпочтительным, чем метод механического разрушения тканей, несмотря на его большую трудоемкость, малый выход хлоропластов и высокую стоимость применяемых реактивов. Использование протопластов позволяет значительно расширить список растений, из тканей которых удается выделять интактные хлоропласты. Данная методика успешно применяется при работе с некоторыми С3-злаками, например с пшеницей и ячменем, некоторыми двудольными С3-растениями — подсолнечником, табаком, горохом, шпинатом, а также со многими видами С4-растений. Это связано с тем, что, во-первых, механическое усилие, необходимое для разрушения плазмалеммы, намного меньше усилия, необходимого для разрушения клеточной стенки в тканях листа, в результате степень повреждения органелл значительно снижается, и хлоропласты, выделенные из протопластов, сохраняются в высокой степени интактными.
