Фотометрические методы

Фотометрические методы количественного определения веществ основаны на Законах Бугера—Ламберта и Бера.

Закон Бугера—Ламберта устанавливает зависимость количества монохроматического света, поглощенного веществом, от толщины поглощающего слоя, т. е. длины оптического пути.

Закон Бера устанавливает прямую пропорциональность между поглощением света и концентрацией вещества в растворе.

Выбор «нулевого» раствора. При количественных определениях в качестве «нулевого» раствора, или раствора сравнения, по отношению к которому определяется поглощение исследуемых растворов, обычно берут чистый растворитель. В этом случае поглощение опытного раствора определяется только концентрацией растворенных в нем веществ.

При определении скорости ферментативной реакции, особенно если опытный раствор имеет некоторую мутность, в качестве «нулевого» раствора удобнее взять такой же раствор, но без добавления необходимых для реакции реагентов. Вместо них вводят воду или буферный раствор. В этом случае регистрируют поглощение веществ, изменяющихся в ходе реакции.