Измерение восстановительной активности

Измерение восстановительной активности изолированных хлоропластов в присутствии акцепторов электронов может быть проведено путем прямых спектрофотометрических определений количества образующихся восстановленных соединений. В качестве акцепторов электронов в этих исследованиях могут быть использованы 2,6-дихлорфенолиндофенол, феррицианид калия K3Fe6, НАДФ+, поскольку окисленная и восстановленная формы этих соединений различаются по спектральным характеристикам. Так, ДХФИФ в окисленном состоянии при pH 6,5 имеет синюю окраску и поглощает при 620 нм, при восстановлении он обесцвечивается. K3Fe6 в окисленном состоянии имеет желтую окраску, поглощает при 420 нм, а в восстановленном — бесцветный. Восстановление НАДФ+ сопровождается изменениями поглощения при 340 нм.

Скорость тока жидкости из колонки устанавливают равной 1 мл/мин. Объем жидкости в колонке перед внесением ДЭАЭ — целлюлозы должен составлять 1/3 объема колонки. Кран колонки закрывают и в колонку наливают из стаканчика по палочке тщательно взмученную взвесь адсорбента так, чтобы жидкость стекала по стенке колонки и осаждающийся адсорбент не увлекал в свою толщу пузырьки воздуха. Суспензии дают осесть, затем примерно через 10 мин открывают кран колонки и продолжают наполнять колонку адсорбентом в токе жидкости, постепенно подливая следующие порции адсорбента. Необходимо, чтобы самый нижний слой адсорбента был ровным, а наполнение колонки равномерным, без воздушных пузырей.