Изолированные хлоропластов

Оценка степени интактности изолированных хлоропластов может быть осуществлена различными способами. Тестом на интакт — ность внешней мембраны хлоропластов может служить их способность осуществлять ассимиляцию углекислого газа или С02-зави — симого выделения кислорода. Так, для высокоинтактных хлоропластов пшеницы или шпината скорость фиксации углекислого газа или скорость С02-зависимого выделения кислорода составляет 80—150 мкмоль/мг хлорофилла в 1 ч и выше. Целостность внешней мембраны определяет также чувствительность хлоропластов к экзогенным добавкам. При неповрежденной внешней мембране хлоропласты не чувствительны к экзогенным акцепторам электронов, таким, как НАДО, феррицианид калия и др. Поэтому наиболее простым методом оценки интактности хлоропластов считают определение их фотохимической активности в присутствии феррицианида калия.

Критерием интактности изолированных мембран может служить степень сопряженности потока электронов с синтезом АТФ. Оценку сопряженности проводят путем регистрации изменения скорости выделения хлоропластами кислорода в присутствии разобщителей, например NH4C1. Увеличение скорости транспорта электронов в присутствии разобщителя в 10 и более раз указывает на высокую интактность изолированных хлоропластов. Работа включает следующие этапы: 1) получение протопластов из мезофилла листьев гороха; 2) получение хлоропластов из протопластов гороха; 3) определение содержания хлорофилла в суспензии хлоропластов; 4) определение степени интактности изолированных хлоропластов по фотохимической активности в присутствии феррицианида калия и разобщителя полярографическим методом.