Метод дифференциального центрифугирования

Получение суспензии хлоропластов методом дифференциального центрифугирования. Гомогенат фильтруют через капроновую ткань и переносят в центрифужную пробирку. Фильтрат в центрифужной пробирке уравновешивают с другой центрифужной пробиркой водой. Проводят Первое центрифугирование при 100g в течение 5 мин. Осадок, содержащий обрывки тканей, ядра, разрушенные клеточные стенки и другие фрагменты, отбрасывают. Супернатант центрифугируют 10 мин при 1000 g . Полученный осадок с целью промывания хлоропластов гомогенизируют кисточкой в центрифужной пробирке с 15 мл незабуференной Среды выделения 2. Проводят Третье центрифугирование в течение 10 мин при 1000 G. Супернатант отбрасывают, а осадок перемешивают с 2 — 3 мл Среды выделения 2. После перемешивания со Средой выделения 2 его переносят в тефлоновый гомогенизатор, гомогенизируют до получения однородной смеси, а затем переносят в мерный цилиндр. Центрифужную пробирку и гомогенизатор споласкивают небольшими порциями Среды выделения 2 для полного перенесения хлоропластов в цилиндр. Конечный объем суспензии в цилиндре — 12 — 15 мл.

Каталитические центры расположены на трех парах а-р-субъе — диниц; у — и е-субъединицы образуют «ствол» CF и необходимы для энергетического сопряжения процессов транслокации протонов и работы каталитических центров.