Принцип зонального электрофореза

На принципах зонального электрофореза основываются широко применяемые для анализа белков, нуклеиновых кислот и надмолекулярных комплексов методы Гель-электрофореза , где в качестве носителя применяют гели крахмала, агара или агарозы, полиакриламида. Использование гелей повышает эффективность электрофореза, поскольку, обладая большей вязкостью, они увеличивают сопротивление трения и делают существенными для разделения такие параметры фракционируемых веществ, как размер и конфигурация.

Наибольшую разрешающую способность электрофореза удается получить, используя гели крахмала и полиакриламида. Они обладают сетчатой структурой с порами определенного размера. Электрофорез на этих носителях сочетает два принципа разделения — по электрофоретической подвижности и на основе молекулярного сита. Движущиеся в гелях частицы испытывают в зависимости от своего размера различное сопротивление трения и, следовательно, не только разделяются по своим зарядам, но и «просеиваются» в зависимости от размера и форм молекул.

Реакция сополимеризации акриламида и N, N’-MeTKreH-6wc — акриламида проходит в присутствии Катализатора, в качестве которого используют обычно окислительно-восстановительные системы, служащие источником свободных радикалов. Чаще всего катализатором служит смесь 0,1 —0,3 % персульфата аммония либо с 0,1 —0,3% NjNjN^N’-TeTpaMemnaTH — лендиамином, либо 3-диметиламинопропиолнитрилом. Возможно также применение системы рибофлавин — ^^^^’-тетраметилэтшгендиамин, которая действует на свету. Эти катализаторы не изменяют характеристик буферных растворов и гелей, обеспечивают быструю полимеризацию, что важно для воспроизводимости результатов. Персульфат аммония в этих системах наиболее предподчтителен, поскольку его можно получить в высокоочищенном виде. Он относительно устойчив при температурах, близких к 0 °С, и практически не выделяет молекулярный кислород. Молекулярный кислород, мелкодисперсные примеси, охлаждение могут замедлить или подавить полимеризацию.

Рекомендуется подобрать условия сополимеризации и стандартизировать их, чтобы гели полимеризовались в течение одного часа.