Рабочий гель

Как правило, носитель состоит из двух слоев: верхний слой — крупнопористый гель , а нижний — мелкопористый гель {рабочий, или Разделяющий, гель). Роль концентрирующего геля заключается в концентрировании образца по мере прохождения его через этот гель. В результате образец подходит к разделяющему гелю в виде очень узкой полосы. Рабочий гель действует по принципу молекулярного сита и обеспечивает разделение частиц не только в соответствии с их зарядом, но и по величине и форме.

Таким образом, в ходе диск-электрофореза смесь сначала концентрируется в узкой полосе крупнопористого полиакриламидного геля, а затем в мелкопористом геле ее компоненты распределяются по величине, форме и заряду молекул. Сочетание эффекта концентрирования и эффекта молекулярного сита обусловливает высокую разрешающую способность этого метода.

Подбор концентрирующего и разделяющего гелей, а также состава буферных систем играет ключевую роль при диск-электро — форезе. При подборе буферных систем важен pH и ионный состав буфера. Как правило, при разделении белков pH буфера в верхнем сосуде меньше pH буфера, насыщающего гель, и он обладает более низкой ионной силой. Благодаря этим различиям образец по мере прохождения через гель-прокладку концентрируется.