Капроновая ткань

Гомогенат фильтруют через 4 слоя капроновой ткани. К зеленому экстракту медленно, при постоянном перемешивании на магнитной мешалке добавляют охлажденный в жидком азоте ацетон до конечной концентрации ацетона 35 %. Выпавший осадок отделяют центрифугированием.

К полученному супернатанту так же медленно, при постоянном перемешивании на магнитной мешалке добавляют охлажденный ацетон до конечной концентрации 15%. Осадок отделяют центрифугированием.

Полученный осадок белков экстрагируют дважды 0,005М трис — HCl буфером. Экстракцию проводят при постоянном перемешивании на магнитной мешалке. Время каждой экстракции 1,5-2 ч.

Объединенные экстракты оставляют на ночь на диализ против трис-HCl буфера 0,0005 М концентрации.

Нециклический транспорт электронов в ЭТЦ хлоропластов связан с окислением воды и выделением кислорода. Восстановительная активность работы ЭТЦ прямо коррелирует с активностью фотоокисления воды и выделением кислорода в хлоропластах. Поэтому регистрация выделения кислорода на свету полярографическим методом является удобным методом оценки активности транспорта электронов в ЭТЦ хлоропластов. При определенных условиях в хлоропластах происходит перенос электронов на кислород, и тогда полярографическим методом также можно наблюдать за поглощением кислорода.

В первом варианте калибровки 1 г свежих дрожжей суспендируют в водопроводной воде и суспензию центрифугируют при 1000g в течение 5 мин. Полученный осадок суспендируют в 1 мл 1 %-й глюкозы, приготовленной на 0,15 М КС1, и преинкубируют в течение 15 мин. Для калибровки электрода 0,2 мл суспензии впрыскивают шприцем в ячейку, предварительно заполненную 1 %-й глюкозой в 0,15 М КС1, и дожидаются полного обеднения среды кислородом.