Современные исследования

В современных исследованиях все большее предпочтение отдают сложным системам диск-электрофореза, где создается Градиент пористости ПААГ. Электрофорез в градиенте пористости имеет ряд преимуществ — самоограничение миграции белков в геле, непрерывное сужение белковых зон. Это обеспечивает высокую фракционирующую способность метода. Выбор буфера и электрического режима электрофореза играет в нем второстепенную роль.

Диск-электрофорез с применением детергентов. При проведении диск-электрофореза белков в ряде случаев используют детергенты. Это могут быть детергенты, несущие заряд, например до — децилсульфат натрия, или нейтральные детергенты, например тритон Х-100. Цель внесения того или другого детергента различна.

Внесение заряженного детергента в образец и буфер, насыщающий гель, играет двоякую роль. С одной стороны, оно препятствует денатурации белков, а с другой — позволяет разделять белки главным образом по размеру молекул и на основе их молекулярной массы. Нейтрализуя собственный заряд белков, додецилсульфат натрия заряжает их примерно одинаково за счет собственного заряда. В этих условиях белки не денатурируют и разделение их идет в соответствии с молекулярной массой и размерами. Данный способ электрофореза применяют в аналитических исследованиях для определения молекулярной массы белков.

Использование нейтральных детергентов типа тритон Х-100 или цетавлона рекомендуется в случае плохой растворимости исследуемых белков в водных буферах. Это, как правило, имеет место при анализе мембранных белков. Тритон Х-100 не вызывает денатурацию белков и значительно улучшает их растворимость. Образование комплексов с тритоном Х-100 можно использовать не только для повышения растворимости белков, но и для их фракционирования.